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至不可不知!全的液相色谱柱知识分享和选择技巧

行业动态发布时间:2021-09-22

不可不知!全的液相色谱柱知识分享和选择技巧 不可不知!全的液相色谱柱知识分享和选择技能 时间:2017⑺⑶1 13:04:00

尽人皆知,现代高效液相色谱分析中,色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏,选择适合的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间,并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多,不同类型的色谱柱分离对象不同,因此,要做适合的选择,必须对此有1定的认识和了解。

色谱柱参数

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物理性质

柱长,内径,如250*4.6mm。1般柱长在2250mm,柱越长,分离度越高,但柱压更高,分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比,所以1昧增加柱长其实不是有效的分离手段,1般情况下,150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。

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粒径,影响色谱分离度。粒径越小,分离越快,柱效越高,但柱压力越高,柱容易被污染,致使柱寿命下降。常见分析柱通常使用5um填料,复杂的多组分样品分离1般使用3.5um粒径,更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那末选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30;但是,3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍,因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。

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孔径,60A,120A,300A等。孔径小,则含孔率高,比表面积大,载碳量高;色谱柱填料孔径大小需和份子大小相匹配,平时使用时请做好备份保证份子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配,通常要求孔径直径是份子直径的3倍以上,1般小份子使用80120A,大份子使用300A。

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颗粒形状,1般有球形和不规则形,当使用黏度较大的活动相时,球形颗粒可以下降柱压,延长色谱柱寿命。

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比表面积,指的是每克填料的表面积,如180m2/g350m2/g,与粒度和含孔率有关;比表面积大,会增加样品与键合相之间的反应,增加保存和分离度;比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间,其实不是比表面积大或小就更好,需要选择适合的比表面积。

化学性质

硅胶基质:通用的基质,强度大,化学修饰容易,但使用的pH值范围有限。

聚合物基质:多为聚苯乙烯2乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化学稳定,利用pH范围宽,具有更强的疏水性,对蛋白质等样品分离效果较好;但强度较小,有机溶剂可能致使聚合物溶胀而受损,批次重复性较差,商品化色谱柱不多,1般价格较贵。

载碳量:基质表面键合相的比例,载碳量高,则保存增加,合适分析非极性化合物。

键合相:键合试剂不同,对化合物的选择性不同,1般长链的烷基键合相比短链的稳定;非极性的键合相比极性的键合相稳定。

封端:用短链将袒露的硅羟基键合后封闭起来,以减少残留的硅醇基,减轻待测组分与酸性硅羟基反应而引发的色谱峰拖尾现象。特别对极性样品而言,未封端处理的色谱柱分离效果较差。

正相 反相色谱

目前市场上主要以反相色谱为主,约占80的比例。

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在了解了色谱柱的基本知识后电池挤压实验机采取先进的压力系统,色谱柱的选择也就迎刃而解了。

柱长及内径的选择

长度的选择:柱越长,总柱效越高,柱越长,分析时间也越长。250300mm是普遍的柱长,实验室1半以上的工作都是采取此规格柱子,1般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500600mm,要求较高分辨率的利用,般用来分离大于50个组份或包括有难分离物资的复杂样品程序升温分析。

内径:柱效力与柱半径平方成反比,内径越小柱效越高,但内径越大,柱容量也增加,允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时,则因柱内每块理论板内不能建立真实的平衡,将会致使色谱蜂畸变,柱分辨率下降,重现性不好。因此对复杂样品需要分离,必须使用小内径柱子。另外一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物,为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子,目前实验室使用常见的柱子内径1般是4.6mm。

1般选择原则:分析大份子量化合物选择大孔径色谱柱;对高pH值或碱性化合物需要选择高封端或特殊封真个色谱柱,以改良峰形,延长色谱柱使用寿命等。

现在商品化的液相色谱柱满目琳琅,根据色谱柱的参数可以给我们提供1个初步的选择,但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异,即便都是C18柱,同1品牌不同系列都有不同的功能,有本事受低pH值的、有耐高温的、有合适碱性样品的等等。所以在选择因此根据最大值来选定色谱柱前要好好研究色谱柱参数,仔细浏览色谱柱说明书,才能找到适虽然今年我国对泰注塑机出口大幅下滑合的色谱柱和适合的分离方法。

编辑点评

仪器市场产品良莠不齐,那每款产品的选择就得尤其慎重。从产品参数到使用方法再到功能比较需要重视的细节很多。只有综合的斟酌多方面因素,终才可以选出合适实验室利用的液相色谱。